کلون کردن و بیان ژن ha ویروس آنفلوانزای پرندگان تحت تیپ h9n2 در حامل های باکتریایی لاکتوکوکوس لاکتیس

ویروس آنفلوانزای پرندگان تحت تیپ h9n2، یکی از معضلات مهمی است که صنعت طیور ایران با آن روبرو است. یکی از راه کارهای مهم مقابله با آن استفاده از واکسن است ولی خصوصیاتی مانند پر زحمت بودن و تزریقی بودن استفاده از آن را در مزارع طیور مشکل ساخته است. بنابراین جایگزینی آن یا واکسن کارا و مناسب لازم به نظر می رسد. در این مطالعه قسمتی از ha1 و ha2 ژن ha ویروس h9n2، که محل-های آنتی ژنیک ویروس را کد می کردند، تکثیر و به درون سیستم بیانی لاکتوکوکوسی مناسب به عنوان مرحله ی ابتدایی ساخت و ارزیابی واکسن زنده کلون شد. ژن مورد نظر با استفاده از دو جفت پرایمر، توسط واکنش pcr تکثیر و به پلاسمیدهای لاکتوباکتریایی بیانی،pnz8148 و pnz8110، به ترتیب برای بیان به شکل سیتوپلاسمی و به شکل ترشحی وارد شد. برای تشکیل پلاسمیدهای pnz8148-ha/c و pnz8110-ha/s، پس از ترانسفورماسیون اولیه به باکتری e. coli mc1061 ، پلاسمیدها استخراج و به باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس سویه nz9000 به روش الکتروپوریشن منتقل شد. در طی هر مرحله صحت کلونینگ و درستی توالی ژن توسط کلونی pcr، برش آنزیمی و تعیین ترادف ژنی تایید شد. sds-page و رنگ آمیزی پروتئین ها با کوماسی بلو و رنگ آمیزی نقره پروتئین های دارای his-tagged خالص سازی شده، نشان داد که پروتئین ha با موفقیت در دو شکل ترشحی و سیتوپلاسمی در لاکتوکوکوس لاکتیس بیان شده است.